如何正確選擇激發(fā)濾光片和熒光濾光片

激發(fā)濾光片與熒光濾光片的要點(diǎn)是確保它們都能有效分離和選擇物質(zhì)的激發(fā)光與發(fā)射熒光的特征波段光譜，同時(shí)最大限度地減少背景光源的干擾。

激發(fā)濾光片的選擇

激發(fā)濾光片主要用于選擇透過(guò)某個(gè)波段的光，以激發(fā)熒光染料。在熒光顯微鏡中，激發(fā)濾光片的作用是僅允許激發(fā)熒光的波長(zhǎng)通過(guò)。其選擇主要基于待測(cè)物質(zhì)的激發(fā)光譜特性，即需要選擇與待測(cè)物質(zhì)激發(fā)光譜的最大峰值波長(zhǎng)相近的最大透射比的濾光片。

激發(fā)濾光片的類型有多種，如干涉濾光片、膠膜濾光片和玻璃濾光片，選擇合適的類型也是根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)需求和應(yīng)用場(chǎng)景。激發(fā)光源的強(qiáng)度對(duì)濾光片的壽命也有影響，因此選擇時(shí)也需要考慮光源的強(qiáng)度。

熒光濾光片的選擇

熒光濾光片主要用于觀察和分離熒光材料發(fā)射的特定波長(zhǎng)光，熒光濾光片的選擇原則是盡可能讓熒光即發(fā)射光通過(guò)，同時(shí)最大程度阻擋激發(fā)光，從而獲得最佳的信噪比，其選擇主要是基于待測(cè)物質(zhì)的熒光光譜特性，即需要能夠?yàn)V去雜散光、瑞利散射光以及部分雜質(zhì)的熒光。在熒光測(cè)量中，熒光濾光片的設(shè)計(jì)目的是消除溶劑的拉曼散射光、瑞利散射光以及部分雜質(zhì)的熒光。

在測(cè)試樣品發(fā)射光譜時(shí)，選擇比激發(fā)波長(zhǎng)大20nm左右的濾光片，以使樣品發(fā)射的熒光透過(guò)但不會(huì)使激發(fā)光雜散光透過(guò)，減少背景光源的干擾。測(cè)試樣品激發(fā)光譜時(shí)，選擇比發(fā)射波長(zhǎng)小20nm左右的濾光片，以確保發(fā)射波長(zhǎng)阻隔，確保發(fā)射波長(zhǎng)之前的光譜能有較好的信號(hào)。

優(yōu)秀的熒光濾光片應(yīng)該要滿足與燃料的激發(fā)峰、發(fā)射峰匹配且交疊小，截止深度深，自發(fā)熒光小，以及透鏡面形好，利于熒光成像的提取。透鏡表面的平整度對(duì)成像質(zhì)量有重要影響，波前扭矩或楔角的不利影響應(yīng)盡可能減少。